外泌體提取是一種分離和純化細胞外泌體的方法,這些細胞外泌體是細胞釋放到細胞外的微小膜囊泡,由脂質雙層包裹著一些細胞成分,如蛋白質、RNA、DNA等。
外泌體提取的原理是通過離心法將混合液(包括培養基、生物體液等)離心,分離出不同密度的顆粒。在最終離心步驟中,細胞外泌體會被沉淀在高密度區域。然后,用生物過濾器過濾這個沉淀,將外泌體分離出來。該方法通常需要多個離心步驟才能獲得純化的外泌體,同時高壓、激光和電場等技術也可以用于提取和純化外泌體。
具體而言,外泌體提取一般可分為以下幾個步驟:
1.培養基或生物體液的采集和初步離心:收集樣品并進行低速離心(約3000 rpm),去除細胞碎片和細胞核等大顆粒;
2.二次離心:傳遞液體給高速離心,通常在20000-25000 rpm下運行,將外泌體沉淀到底部;
3.洗滌:將外泌體沉淀用PBS等緩沖液洗滌,以去除可能存在的細胞殘留和其他雜質;
4.三次離心:將洗滌后的外泌體沉淀離心以去除殘留的緩沖液等;
5.簡單的純化:用不同的技術(如生物過濾器、密度梯度離心)去除剩余細胞或化合物,并分離純化的外泌體。